冬天過得很快，春耕之後京畿北陸一帶即將遍地烽火，首先是織田信長集結三萬大軍進駐安土城，隨後鬆平家康帶領六千三河勇士加入織田信長的聯軍。
淺井長政暫時不知道織田信長是否會進攻他，於是也集結本家兵馬伺機而動，同時也派人去通知朝倉義景。
但是武田正信爲了噁心朝倉義景，故意讓田村信秀帶兵在加賀越前邊境進行軍事演練，這讓朝倉家的大軍停留在一乘谷城不敢妄動。
隨後足利義昭的使者就到達越中詢問武田正信的意思，武田正信對足利義昭沒什麼感覺，而且他是最後一批得到足利義昭的書信，所以，他直接回懟就是正常演習。
使者在武田正信這裡碰壁，灰頭土臉般的回到了二條御所，這讓足利義昭對武田正信也有一些不滿意了。
看準機會的織田信長率領兩萬大軍到達淺井家的主城小谷城，先是放火將小谷城下的城下町燒掉，逼淺井軍出陣。
接着順着姊川直上包圍了左岸的橫山城，然後與淺井軍形成了對峙之勢，其實是織田信長在等待鬆平家康的援軍。
三月二十七日，鬆平家康率領六千人來援；同日，朝倉家派一門大將朝倉孫四郎景健率領1萬軍來援（這樣重大的戰役，家主朝倉義景竟然不親自出陣，其實已經宣佈了朝倉家的失敗，當然，朝倉義景也害怕武田正信偷他老家）。
但是朝倉義景出兵當天，邊境上一萬武田軍撤退，這讓朝倉義景鬆了一口氣，隨後就傳來武田正信出征佐渡的消息。
朝倉義景轉而一想，覺得就是武田正信警告他不要在武田家背後搞小動作，朝倉義景一時間十分膩歪。
織田信長不等鬆平家康休息，馬上開始軍前評定。鬆平家猛將本多平八郎忠勝在會議上道：“請信長公將朝倉軍交給我們三河男兒吧！”
看到鬆平家的三河軍士氣空前高漲，信長下達了第二天與朝倉，淺井軍決戰的命令。
三月二十八日，淺井家與朝倉家分別在野村和三家村擺開陣勢迎擊織田軍和鬆平軍，姊川合戰終於打響。
南軍陣容：
織田信長
二百四十餘萬石，總兵力6萬，來到姊川的不到半數。
第一陣阪井政尚
第二陣池田信輝（恆興）
第三陣木下秀吉
第四陣柴田勝家
第五陣森可成
第六陣佐久間信盛
（以上各隊兵力各爲3000）
本陣織田信長兵5000
包圍橫山城軍勢：
丹羽長秀兵3000
氏家直元（卜全）兵1000
安藤範俊（守就）兵1000
另有稻葉一鐵通朝率兵1000前來助陣。
鬆平家康
六十餘萬石，總兵力在16000左右，來到姊川的大概有5000
第一陣酒井忠次
第二陣小笠原長忠
第三陣石川數正
（以上各隊兵力各爲1000）
本陣鬆平家康兵2000餘
北軍陣容：
淺井長政
三十九萬石，總兵力約1萬
第一陣磯野員昌兵1500
第二陣淺井政賴兵1000
第三陣阿閉貞秀兵1000
第四陣新莊直賴兵1000
本陣淺井長政兵3500
朝倉義景
八十七萬石，兵數2萬，來姊川大概1萬
第一陣朝倉景紀兵3000
第二陣前波新八郎兵3000
本陣朝倉景健兵4000
姊川，位於琵琶湖的東北。發源於近江北境的金糞川，一直流到伊吹山以西的尚西流入琵琶湖爲止，傳說是閻魔大王姐姐龍王的居所。
三月二十八日午時3點左右，朝倉軍在三田村擺開陣勢，不斷叫罵和用火槍挑撥對岸的鬆平軍。鬆平軍終於按捺不住，開始對朝倉軍突擊。
鬆平軍以小笠原長忠爲先陣，右邊酒井忠次、神原康政，左邊本多平八郎忠勝、內藤信重、大久保忠世，鬆平家康則親自坐鎮中路。
本多忠勝與神原康政此時都只有21歲，正是血氣方剛的時候。開戰不久，朝倉方的黑阪備中守、小林瑞周軒、魚住左衛門尉就已被兩人討取，在兩人的鼓舞下，鬆平軍無不以必死的精神與人數佔絕對優勢的朝倉軍死戰。
戰到酣時，鬆平軍軍勢開始呈現不支的局面，朝倉軍急忙渡到姊川的左岸試圖徹底擊潰鬆平軍，鬆平家康親自坐鎮左路，連續擊退了朝倉軍十多輪的攻勢。
這個時候，酒井忠次和神原康政部成功的渡到姊川的上游，趁機攻打朝倉軍完全沒有防守的右路，朝倉軍立即陷入混亂的狀態。
鬆平家康馬上率隊反擊，朝倉軍大亂，全軍開始往姊川上游退卻。
這個時候，鬆平軍已經完全佔到上風，朝倉軍中只有真柄十郎左衛門直隆所率一部仍在努力奮戰，就連總大將朝倉景健都被團團包圍。
真柄十郎左衛門直隆，是以大力聞名北國的朝倉家猛將，出戰時已是60歲的老人，仍然手持七尺八寸的大刀死戰。（弟弟直澄和兒子隆基也使用六尺五寸的大刀）在不懈的突擊下，終於將大將朝倉景健救出。一時間縱橫戰場，無人敢近，朝倉家一度呈現反敗爲勝的機會。
這個時候，鬆平軍勾阪氏部等兄弟四人從中軍衝出，勾阪五郎次郎與直隆單挑，只一合就被直隆斬爲兩半。
勾阪氏部乘機偷襲，用手鍊將直隆的大刀打落，真柄直隆連忙抽出隨身的小太刀迎戰，勾阪氏部不敵，大拇指爲直隆削斷，拔馬便走，直隆連忙去追，誰知背後中了勾阪六郎五郎的鏈錘，摔倒在地。勾阪氏部回馬一刀，取了首級。
直隆兒子隆基見狀大怒，追上勾阪六郎五郎，將其斬於馬下，單槍匹馬衝入鬆平陣中，力盡而亡。真柄父子一死，朝倉軍更加一敗塗地，多位大將戰死。
眼見敗局已定，100多位越前武士，每人手持着四尺五寸的野太刀，組成敢死隊，意圖與鬆平家康同歸於盡，德川家臣清水久三郎、加藤喜介正次、天野三郎兵衛康景等人趕緊堵在德川家康的馬前，將試圖襲擊家康的越前敢死隊和騎兵一一砍翻，家康本人也揮刀奮力拼殺，才免遭不測。
腳下人頭滾滾，人踩在地上如踏入無間地獄一般恐怖。歷經生死搏殺，朝倉軍終於退到了姊川的上游，德川軍無力繼續追擊，眼睜睜看着朝倉家敗軍撤退。
另一邊淺井軍的前陣大將磯野丹波守員昌，勇名無雙，一開戰便被兵力遠不如己的淺井軍佔據了上風。
阪井政尚的第一陣很快就被擊退，接着池田信輝的第二陣也被擊敗，木下秀吉的部隊大多來自近江，因爲磯野的關係，很快也敗下陣來。
森可成與柴田勝家隊更被逼到了小谷城下的十町旁，眼見信長的本陣就要與淺井軍交戰之時，收到鬆平軍初顯勝勢消息的稻葉一鐵貞通毅然率軍殺到淺井家的右路，包圍橫山城的安藤與氏家軍也殺進淺井家左路。
信長軍趁勢回攻，淺井軍終於抵擋不住，敗下陣來，這段號稱織田軍有十一段陣勢被磯野員昌衝破的紀錄首見於江戶時代初期的淺井三代記，同時代的文書或紀錄並未記錄此事。
戰後，信長向此戰的功臣美濃三人衆送去感狀、名馬、太刀等等，淺井軍中，能像朝倉家真柄直隆般壯烈戰死的，有遠藤喜右門尉直經和安養寺三郎左衛門兩人。
遠藤喜右門尉直經，自從合戰開始便將臉上塗滿了鮮血，一副披頭散髮的樣子衝入敵陣。眼看已經到了信長的本陣之中，爲竹中半兵衛的弟弟久作發現，悄悄來到他的面前，大喝一聲：“淺井家遠藤喜右門尉在此！”遠藤功虧一簣，身中三十多槍後壯烈戰死。
安養寺三郎左衛門，是當年淺井長政與織田信長同盟的積極發起者之一，看到淺井家大敗後，擔任殿軍一職，討敵28人後壯烈戰死，己部183人全部戰死，無一人生還。